D-Luciferin

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Chinese Name 中文名	D-荧光素
English Name 英文名	D-Luciferin
Alias 别名	(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazoly)-2-thiazoline-4-carboxylic acid;Firefly Luciferin
CAS NO.	2591-17-5
Formula 分子式	C11H8N203S2
M.W. 分子量	280.32
Class 分类	生化试剂

活体成像技术（optical in vivo imaging）目前主要采用生物发光（bioluminescence）与荧光（fluorescence）两种技术，生物发光法是基于荧光素酶能催化底物（D-Luciferin或Coelenterazine）化学发光的原理，将体外能稳定表达荧光素酶的细胞株植入动物体内，与后期注射入体内的底物发生反应利用光学系统检测光强度，间接反映出细胞数量的变化或细胞的定位。这项技术已被广泛应用于多个领域，最常用的有肿瘤或疾病动物模型的建立，并可用于病毒学研究、siRNA研究、干细胞研究、蛋白质相互作用研究等。

原理：常见的荧光素酶有两种，分别是萤火虫荧光素酶（firefly luciferase，编码基因是luc）和海肾荧光素酶（Renilla luciferase，编码基因是Rluc），前者的底物是D-Luciferin，后者的底物是Coelenterazine。它们共同的作用原理是在ATP和荧光素酶的催化作用下，底物被氧化发光（不同底物光的颜色和波长不同），当底物过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性。

应用：

1）体外化学发光分析（in vitro）；

2）活体成像实验（in vivo）；

3）高灵敏度ATP分析；

4）活细胞、组织或生物体内luc标记基因和荧光素酶-融合基因体内/体外表达的成像分析；

5）广泛用于报告基因分析，免疫分析和ATP荧光卫生监测分析；

步骤：

Protocol 1In Vitro Bioluminescent Assays / 体外生物发光检测

1）用33.3 mL蒸馏水溶解1.0 g D-荧光素，配制成100 mM的储存液（200×，浓度30mg/ml）。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。

2）用组织培养基1∶200稀释储存液，配置工作液(终浓度150μg/mL)。

3）去除培养细胞的培养基。

4）待图像分析前，向细胞内添加1×荧光素工作液，然后进行图像分析。

Protocol 2：In vivo analysis / 活体成像分析

1）用无菌的PBS（w/o Mg2+、Ca2+）配制D-荧光素工作液(15mg/mL)，0.2 um滤膜过滤除菌。一旦使用，保持冰冷且避光。

2）注射量取决于注射方式，具体如下：

注射方式剂量静脉注射（25-27 gauge针头）按10 uL/g体重浓度，加入相应体积的15 mg/mL荧光素工作液腹腔注射（25-27 gauge针头）按10 uL/g体重浓度，加入相应体积的15 mg/mL荧光素工作液肌肉注射（27 gauge针头）50 uL，浓度为1–2 mg/mL荧光素工作液鼻内注射（pipette）50 uL，浓度为3 mg/mL荧光素工作液3）注射入体内5-10分钟后，进行成像分析。

溶解：0.25%浓度溶解于甲醇，形成近乎无色至浅黄色的清夜

保存：-15°C 避光

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